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當(dāng)前位置:首頁技術(shù)文章安捷倫色譜柱選擇指南:反相、正相、HILIC如何選?

安捷倫色譜柱選擇指南:反相、正相、HILIC如何選?

更新時間:2025-11-14點(diǎn)擊次數(shù):241
   在高效液相色譜(HPLC)分析中,安捷倫色譜柱的選擇直接決定分離效果與實(shí)驗(yàn)效率。安捷倫的反相、正相及HILIC系列色譜柱憑借優(yōu)異性能覆蓋各類應(yīng)用場景。核心選擇邏輯可概括為:根據(jù)化合物極性、溶解性及檢測需求,匹配色譜柱的固定相特性與流動相體系,以下是詳細(xì)指南。
 
  反相色譜柱:通用型分離
 
  反相色譜柱是實(shí)驗(yàn)室常用的類型,其固定相為非極性(如C18、C8鍵合相),流動相為極性混合溶劑(水-甲醇/乙腈),分離機(jī)理基于“相似相溶”——弱極性至中等極性化合物與固定相作用力更強(qiáng),保留時間更長。
 
  安捷倫反相色譜柱具備高柱效與優(yōu)異峰形,尤其適合藥物、脂類、小分子有機(jī)物等分析場景。選擇要點(diǎn)包括:分析物為非極性或中等極性、在水相或水-有機(jī)混合溶劑中溶解性良好;需高分辨率分離或梯度洗脫方案時,反相柱是優(yōu)解。例如,藥物雜質(zhì)檢測、環(huán)境污染物分析等常規(guī)實(shí)驗(yàn),優(yōu)先選用反相色譜柱。
 
  正相色譜柱:極性化合物與異構(gòu)體分離利器
 
  正相色譜柱采用極性固定相(如硅膠、氨基(-NH?)、氰基(-CN)鍵合相),流動相為非極性溶劑(正己烷、異丙醇),通過氫鍵、偶極-偶極作用實(shí)現(xiàn)分離——極性越強(qiáng)的化合物與固定相結(jié)合越牢固,后流出體系。
 
  安捷倫正相柱適用于糖類、氨基酸、異構(gòu)體等強(qiáng)極性或中等極性化合物分析。選擇場景明確:當(dāng)分析物在非極性溶劑中溶解性好,或需分離結(jié)構(gòu)相似的異構(gòu)體時,正相柱優(yōu)勢顯著。需注意,正相柱對水分敏感,需嚴(yán)格控制流動相含水量,更適合等度洗脫模式。
 
  HILIC色譜柱:強(qiáng)極性水溶性化合物的補(bǔ)充方案
 
  親水相互作用色譜(HILIC)是反相、正相的重要補(bǔ)充,采用極性固定相(如裸硅膠、酰胺基)與高比例有機(jī)相-水相流動相(乙腈-水,水相占比3%-40%),通過水膜分配與氫鍵作用保留強(qiáng)極性水溶性化合物——這類物質(zhì)在反相柱中幾乎無保留,在正相柱中溶解性不佳。
 
  安捷倫系列專為強(qiáng)極性小分子設(shè)計,耐水性強(qiáng)、LC/MS兼容性好,尤其適合糖類、尿素、磷酸化化合物等分析,還可替代離子對色譜用于EPA方法1694。選擇關(guān)鍵:分析物為強(qiáng)極性水溶性物質(zhì),或需匹配質(zhì)譜檢測器時,HILIC柱是理想選擇。使用時需注意保持流動相有機(jī)相比例不低于40%,避免磷酸鹽緩沖液析出。

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