用于發(fā)酵過(guò)程作為活細(xì)胞催化劑的微生物，包括細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌四大類。來(lái)源于自然界大量的微生物，從中經(jīng)分離并篩選出有用菌種，再加以改良，貯存待用于生產(chǎn)。是從事微生物學(xué)及生命科學(xué)研究的基本材料，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，診斷制品的制備，菌苗的生產(chǎn)、微生物致病性研究。

基本信息

簡(jiǎn)介

【注音】jǚnzhǒng

【釋義】是指食用菌、工業(yè)菌、農(nóng)用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種是從事微生物學(xué)及生命科學(xué)研究的基本材料，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，診斷制品的制備，菌苗的生產(chǎn)、微生物致病性研究，藥物的抑菌試驗(yàn)及藥品微生物檢驗(yàn)等都有一套完整的菌種菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。

法律規(guī)定

2006年3月中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《食用菌菌種管理辦法》規(guī)定：“農(nóng)業(yè)部主管全國(guó)菌種工作?？h級(jí)以上地方人民政府農(nóng)業(yè)（食用菌，下同）行政主管部門(mén)負(fù)責(zé)本行政區(qū)域內(nèi)的菌種管理工作?！薄翱h級(jí)以上地方人民政府農(nóng)業(yè)行政主管部門(mén)應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)食用菌種質(zhì)資源保護(hù)和良種選育、生產(chǎn)、更新、推廣工作，鼓勵(lì)選育、生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)相結(jié)合。”

篩選

用于發(fā)酵過(guò)程作為活細(xì)胞催化劑的微生物，包括細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌四大類。來(lái)源于自然界大量的微生物，從中經(jīng)分離并篩選出有用菌種，再加以改良，貯存待用于生產(chǎn)。

菌種篩選工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩，挑選具有某種能力的有用菌種。

菌種分離首先是從土壤或腐生植物中收集含菌樣品，用無(wú)菌水稀釋后，涂布于置有適宜細(xì)菌、放線菌或霉菌生長(zhǎng)的瓊脂培養(yǎng)基平皿上，并將其倒置于恒溫箱中，培養(yǎng)一定時(shí)間，平皿上長(zhǎng)出的許多單個(gè)菌落（單一微生物的集落）經(jīng)分別分離后即為各種純種菌株,簡(jiǎn)稱純種,移種至試管斜面培養(yǎng)基上，置4℃冰箱備用。

根據(jù)不同的篩選目的，采用不同的篩選模型。如常規(guī)篩選抗生素產(chǎn)生菌的方法是將土壤中分離所得的純種，在含有瓊脂培養(yǎng)基的平皿上培養(yǎng)后，用打孔器將菌塊移至含有試驗(yàn)菌的瓊脂培養(yǎng)基上，在適宜的溫度下培養(yǎng)一定時(shí)間后取出，如在菌塊的周?chē)型该鞯囊志?，則表明此菌種具有產(chǎn)生抑制試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的抗菌物質(zhì)的能力。

所得菌種經(jīng)過(guò)搖瓶液體發(fā)酵，測(cè)定發(fā)酵液或菌絲體內(nèi)抗生素的含量，選出生產(chǎn)能力高的菌種。另一方面對(duì)所提取的抗生素進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析、藥理試驗(yàn)及臨床試驗(yàn)等，確為有效者，即可作為生產(chǎn)菌種。

又如篩選脂肪酶生產(chǎn)菌種的方法是將分離所得的霉菌涂布于含有牛脂的瓊脂培養(yǎng)基上，恒溫培養(yǎng)一定時(shí)間，如菌落周?chē)霈F(xiàn)透明圈的，則該菌具有分解脂肪的能力，進(jìn)一步作搖瓶發(fā)酵測(cè)定酶活力，挑選產(chǎn)量高者作生產(chǎn)菌種的出發(fā)菌株。

改良制備

菌種改良

即采用遺傳育種的方法，使野生型菌株 - 從自然界分離篩選而得的出發(fā)菌株的遺傳因子DNA發(fā)生突變、重組，從而從中選出產(chǎn)量高、成品質(zhì)量好或具有新的培養(yǎng)特性如耐產(chǎn)物抑制、能利用廉價(jià)原料以及具有生產(chǎn)新品種能力的優(yōu)良菌種。采用的方法有誘變育種、雜交育種、細(xì)胞融合技術(shù)和重組DNA技術(shù)。

誘變育種是利用誘變因子如紫外線、鈷－60、乙烯亞胺類等物理或化學(xué)誘變劑處理生產(chǎn)菌株的單孢子懸浮液，以獲得誘發(fā)突變株。隨后進(jìn)行突變株的篩選，從中篩選高產(chǎn)菌株。由于隨機(jī)的突變?nèi)后w中，有益突變所占比例很低，要獲得高產(chǎn)突變株必須進(jìn)行大量篩選。

近年來(lái)，隨著發(fā)酵代謝控制研究的發(fā)展,可根據(jù)生物合成途徑中的反應(yīng)點(diǎn),并通過(guò)它們的改變以提高產(chǎn)率或其他特性，如選育抗產(chǎn)物反饋抑制的突變株、增加細(xì)胞透性的突變株及營(yíng)養(yǎng)缺陷型的突變株等。這種“理性篩選法”廣泛應(yīng)用于氨基酸產(chǎn)生菌的選育。

菌種制備

也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)

大菌體量及合成產(chǎn)物之用。種子制備包括孢子制備和菌絲體制備（見(jiàn)圖），其中 - 1～ - 4為孢子制備過(guò)程。保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無(wú)菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天 - 或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子，對(duì)于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基。

將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10％以下，并放入4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。放線菌孢子的培養(yǎng)基大多是采用麩皮或豌豆浸出液、牛肉膏及無(wú)機(jī)鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴(kuò)大的扁瓶孢子培養(yǎng)基中,于28～37℃培養(yǎng)5～14天。

所獲得的大量孢子可直接作為種子罐的種子如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。

其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿等）,及無(wú)機(jī)鹽 - 如磷酸鹽等。作為發(fā)酵罐 - 7的種子應(yīng)是生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10％～20％。

菌種保存

使優(yōu)良菌種的性狀保持穩(wěn)定，人為地創(chuàng)造條件，使菌種的新陳代謝活動(dòng)處于不活潑狀態(tài)，即選取優(yōu)良菌種的休眠體（孢子或芽孢）或富有生命力的懸浮液在低溫或脫水狀態(tài)下保存。

低溫保存法

①簡(jiǎn)單保存法，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1～2個(gè)月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3～4個(gè)月；

②液氮超低溫保存法，將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10％甘油或其他低冰點(diǎn)液體中，密封于安瓿管內(nèi)，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至-35℃時(shí)，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、放線菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物，都可用此法長(zhǎng)期保存。

脫水保存法

①沙土保存法，能產(chǎn)孢子的細(xì)菌、放線菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合，經(jīng)稀酸處理洗凈過(guò)篩,裝入小試管內(nèi),裝置高度為1cm;滅菌2～3次，烘干后即可將在斜面培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好的孢子，用無(wú)菌蒸餾水2～2.5ml制成孢子懸液，吸取少許加入沙土管中，經(jīng)真空抽干，外觀呈松散狀態(tài),于4℃冰箱保存，保存期可達(dá)5～7年。

②冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護(hù)劑（一般用脫脂牛奶或血清）相混合，放在安瓿管內(nèi)于-20～-30℃的乙醇浴中速凍。然后，在低溫下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽結(jié)凍，熔封安瓿管，于低溫下保存。保存期可達(dá)5～10年之久。

③石蠟油封存法，在斜面菌種培養(yǎng)物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。

食用菌

一,菌種的概念原意是指孢子 - 相當(dāng)于植物的種子,但在實(shí)際生產(chǎn)中,常將經(jīng)過(guò)人工培養(yǎng)的純菌絲體連同培養(yǎng)基質(zhì)一同叫做菌種.

二,菌種的類型在生產(chǎn)中根據(jù)菌種的來(lái)源,繁殖代數(shù)及生產(chǎn)目的,把菌種分為母種,原種和栽培種.分別叫一級(jí)種,二級(jí)種,三級(jí)種.

母種:將純菌絲體或孢子在試管培養(yǎng)基中繁殖而成.可以繁殖原種,也適宜菌種保藏.

原種:母種菌絲在固體培養(yǎng)基上繁殖而成.這一過(guò)程增強(qiáng)菌絲對(duì)培養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)性,又起到擴(kuò)繁的作用.原種可以直接出菇.

栽培種:由原種擴(kuò)繁而成.主要是為了擴(kuò)繁,為生產(chǎn)提供足夠的菌種

分離

為了獲得某種真菌類藥材的純菌種，必須從其它微生物中分離出來(lái)，稱為菌種的分離。常用的分離方法有下列3種：

組織分離法

先將所需的野生或家種藥用真菌采集回來(lái)，選取新鮮、個(gè)體大、壯實(shí)、中齡及無(wú)病蟲(chóng)害的子實(shí)體（或菌核、菌索），作為分離用的材料。若為子實(shí)體，取其菌蓋或菌柄組織；若為菌核，取其全部（如麥角）或部分（如茯苓）菌核；若為菌索，取其部分根狀菌索（如蜜環(huán)菌）。再用0.1%升汞或75%酒精進(jìn)行表面消毒2分鐘，用無(wú)菌水（或冷開(kāi)水）沖洗數(shù)次，洗凈殘留的藥液后切成小塊。

然后，放入PDA培養(yǎng)基的試管或培養(yǎng)皿上，置24～26℃溫度下，培養(yǎng)5～7天。在分離的真菌組織周?chē)?jiàn)長(zhǎng)有白色菌絲時(shí)，應(yīng)及時(shí)將菌絲移至斜面試管培養(yǎng)基上，再置溫度24～26℃下培養(yǎng)7～10天，即得純菌種。所得的純菌種還可繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)或保藏。

孢子分離

又可分為以下幾種方法：

- 1）褶上涂抹法：選取新鮮、健壯、未開(kāi)傘、未破裂的子實(shí)體，洗凈后用0.1%升汞或75%酒精表面滅菌2分鐘，然后連同培養(yǎng)基一起放入接種箱內(nèi)，經(jīng)福爾馬林熏蒸消毒12～24小時(shí)，再按無(wú)菌操作技術(shù)將接種環(huán)在子實(shí)體菌褶上涂抹，把涂抹后帶孢子的接種環(huán)在培養(yǎng)基上劃線接種，，最后置于25～28℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，可得純菌種。

- 2）孢子印采集法：取滅過(guò)菌的載玻片、試紙或黑布，置于新鮮、未開(kāi)傘或未開(kāi)裂的子體菌褶的下方。經(jīng)24小時(shí)后，便落下孢子，形成印痕（即孢子?。Ｈ缓?，用接種環(huán)或玻璃棒蘸取孢子，接種在平面或斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，可得純菌種。

- 3）孢子收集器采集法：孢子收集器由玻璃鐘罩、培養(yǎng)皿、三角架、搪瓷盤(pán)等組成。鐘罩下為一搪瓷盤(pán)，直徑25厘米左右，盤(pán)內(nèi)先墊襯4～6層紗布，中央放1副9厘米直徑的培養(yǎng)皿，大蓋口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培養(yǎng)皿上放1只鉛絲繞成的三角架，再將帶孔的玻璃鐘罩蓋上，頂上罩孔用棉塞塞好，最后，用紗布包好整個(gè)孢子收集器，置于高壓滅菌鍋或蒸籠內(nèi)滅菌2小時(shí)。

孢子收集器滅菌消毒后，放入無(wú)菌室或無(wú)菌箱內(nèi)。然后，用小刀割取1塊4～5厘米大小的子實(shí)體，插在收集器內(nèi)的三角架頂上（若無(wú)孢子收集器，也可用培養(yǎng)皿代替）。再置于溫度24～26℃下培養(yǎng)24小時(shí)，培養(yǎng)皿中便可見(jiàn)到白色粉狀物，此即為孢子。

此時(shí)，可將孢子收集器再移至接種箱內(nèi)，取出培養(yǎng)皿，蓋好，并在培養(yǎng)皿內(nèi)加入10～2毫升的無(wú)菌水，使孢子散于本中，成為孢子懸浮液。然后，再用無(wú)菌打針筒或吸管吸取孢子懸浮液，接種于試管斜面培養(yǎng)基上，每管注2～3滴。置于24～26℃溫度下培養(yǎng)5～7天，培養(yǎng)基上便可長(zhǎng)出白色菌落。

待菌落直徑有0.5厘米時(shí)，選健壯的菌落，再移接于另一試管的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)。當(dāng)白色菌絲長(zhǎng)滿試管時(shí)，便得純菌種。

寄主分離法

即從生長(zhǎng)有某種真菌的寄主體上（如茯苓、木耳木段）取下木片，進(jìn)行分離的方法。如木耳制種時(shí)，可選野生、朵大、出耳多、質(zhì)厚的耳棒（即長(zhǎng)有木耳的木段）。采集后，削去耳根下的樹(shù)皮，將其橫斷面鋸成1厘米厚的木片，在無(wú)菌條件下，切去無(wú)耳菌絲部分，留下有耳菌絲部分，浸入0.1%升汞水中1分鐘，取出再用無(wú)菌水沖去木片上的汞液。

然后，用解剖刀將木片切成0.5厘米的小塊，放入斜面培養(yǎng)基內(nèi)，置24～26℃下培養(yǎng)，及時(shí)淘汰雜菌，選取純菌絲進(jìn)行移植培養(yǎng)，即得菌種。